中大新聞網(wǎng)訊（通訊員梁思佳）近日，中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院梁思佳副教授、周家國教授和中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院區(qū)景松教授團隊合作在巨噬細胞泡沫化和動脈粥樣硬化研究中取得進展。該研究結(jié)果發(fā)表在心血管研究權(quán)威期刊European Heart Journal上。該研究揭示了巨噬細胞NFATc3（活化T細胞核因子c3）通過上調(diào)miRNA-204抑制動脈粥樣硬化形成的作用機理，發(fā)現(xiàn)胞漿miRNA-204-5p靶向抑制SR-A，胞核miRNA-204-3p靶向抑制CD36，兩者共同抑制巨噬細胞泡沫化和動脈粥樣硬化。
動脈粥樣硬化是一種炎癥反應(yīng)啟動的脂質(zhì)沉積性疾病，是多種心腦血管疾病的共同病理基礎(chǔ)，由其所致的腦卒中，冠心病及心肌梗死等心腦血管事件嚴重危害人類健康。深入探討動脈粥樣硬化發(fā)病機制，尋找新防治靶點，對治療動脈粥樣硬化性心腦血管疾病具有重要的科學(xué)意義和價值。
該研究發(fā)現(xiàn)動脈粥樣硬化斑塊中巨噬細胞核中NFATc3表達降低。同時，循環(huán)外周血單核細胞中的 NFATc3 水平與動脈粥樣硬化患者的疾病嚴重程度呈負相關(guān)。通過在體動物實驗發(fā)現(xiàn)，巨噬細胞特異性敲除NFATc3可促進動脈粥樣硬化發(fā)展，過表達NFATc3則抑制動脈粥樣硬化形成，但并不影響血脂水平。機制分析發(fā)現(xiàn)NFATc3主要通過抑制清道夫受體SR-A和CD36的表達，進而抑制巨噬細胞的脂質(zhì)沉積和泡沫化。有趣的是，NFATc3作為轉(zhuǎn)錄因子并不直接與SR-A和CD36基因啟動子區(qū)結(jié)合調(diào)控其表達。鑒于miRNA能抑制靶基因的表達，研究者推測NFATc3可能通過調(diào)控miRNA表達抑制SR-A和CD36的水平。通過多組學(xué)綜合分析發(fā)現(xiàn)NFATc3能夠明顯上調(diào)miR-204-5p和miR-204-3p的表達。通過熒光素酶實驗和啟動子序列缺失實驗分析檢測到NFATc3結(jié)合在miR-204基因進化保守位點上游-1.5 kb處，并靶向調(diào)節(jié)miR-204的轉(zhuǎn)錄，且miR-204能抑制巨噬細胞的脂質(zhì)沉積和泡沫化。
pre-miR-204經(jīng)過剪切能形成miR-204-3p和miR-204-5p兩個成熟體，一方面，miR-204-5p通過經(jīng)典途徑在胞漿靶向SR-A 3’-UTR抑制SR-A的表達。另一方面，通過ChIP-seq/ChIP-PCR/RIP等技術(shù)發(fā)現(xiàn)miR-204-3p在細胞核通過抑制Ago2蛋白和組蛋白H3K27ac、H3K4me3在CD36啟動子上的富集從而參與CD36的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。該研究還利用Crispr/cas9基因編輯技術(shù)突變NFATc3在miR-204啟動子上的結(jié)合位點，再次證實miR-204介導(dǎo)了NFATc3對于SR-A和CD36的抑制作用。此外，在體動物實驗證明巨噬細胞過表達miR-204-5p和miR-204-3p能明顯抑制NFATc3敲除對動脈粥樣硬化的促進作用。
該研究首次提供了巨噬細胞 NFATc3 是動脈粥樣硬化重要抑制分子的直接證據(jù)，表明 NFATc3/miR-204軸是治療動脈粥樣硬化的新靶點。此外，目前臨床上常用的免疫抑制劑環(huán)孢素A和他克莫司通過特異性抑制 Calcineurin-NFAT通路活化，從而抑制器官移植后的免疫排斥反應(yīng)。但免疫抑制劑長期應(yīng)用后發(fā)生動脈粥樣硬化不良反應(yīng)阻礙了該類藥物的臨床應(yīng)用，該研究結(jié)果表明，抑制Calcineurin-NFAT 信號可能是該類免疫抑制劑致動脈粥樣硬化作用的分子基礎(chǔ)。
單核/巨噬細胞NFATc3抑制泡沫細胞形成和動脈粥樣硬化分子機制模式圖
該工作受到國際同行的高度關(guān)注，European Heart Journal同期邀請了動脈硬化研究領(lǐng)域著名學(xué)者紐約大學(xué)的Kathryn J. Moore教授對該研究成果發(fā)表了評論，Kathryn J. Moore教授在評論中進一步肯定了NFATc3 作為治療動脈粥樣硬化潛在治療靶點的重要性（詳見https://doi.org/10.1093/eurheartj/ehab640）。
中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院梁思佳副教授、周家國教授和中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院區(qū)景松教授為該論文的通訊作者，中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院博士研究生劉秀，郭家偉，林曉純等為論文的第一作者，該研究受到國家自然科學(xué)基金重點項目和面上項目的支持。
